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四向流式細胞分選儀

 

 

The BD FACSAria™ III is built on the solid foundation of patented technologies, superior multicolor performance, and legendary ease-of-use that has led to the unparalleled success of the BD FACSAria. Since the introduction of the first BD FACSAria in 2003, each successive generation has opened the complex world of cell sorting to a broader audience of researchers and wider range of applications. Now, the BD FACSAria III system is even more powerful, dependable, and easy to use.

原理

        Cell sorter 的設計原理即使用噴墨技術(ink-jet graphic printing)及小水滴的靜電偏折(electrostatic deflection)。利用細胞大小、光散射程度、細胞的表面受體等的特徵、甚至DNA定量參數相關分析測量,從一個複雜的細胞混合體中鑑別細胞族群,再利用高頻率振盪的噴嘴(vibration of nozzle),將水柱(stream)在離orifice固定的距離分裂(break-off)成小水滴(drop)。要篩選帶有目標細胞的小水滴可由flow cytometer 給予水滴正電或負電,當通過高壓電場時,帶電的水滴則往與電壓相反的方向偏折而被導入收集管中,如此即可分選出特定的細胞種類以進行功能研究,進一步培養或是做其他的分析

 

應用範圍
 
1. 分選單核性白血球 (Monocytes)以從事型態學的研究。
2. 分選具有異常DNA含量或Cytokeratin陽性之腫瘤細胞,以進行形態學的研究。

3. 根據轉染基因之表達情形,篩選出已被轉染成功或經病毒感染之細胞(Transfected or virally infected cells)再做細胞培養及再測試。
4. 根據表面抗原之含量來進行活細胞分選,以利後續之螢光在位雜交研究實驗(Fluorescence In Situ Hybridization)可藉以偵測XY染色體之存在。

5. 分選具有異常DNA含量之細胞核,以利於後續之在位螢光染色研究 (FISH) 及顯微鏡檢查分析

6. 可對分選出的細胞進行PCR檢測看細胞是否含有Y染色體的序列

7. 分選出自然殺手細胞 (NK cells)以從事該群細胞之功能性檢測

8. 分選細胞之純度測試

9. 估計並比較細胞內部之核酸含量以做為分類及種原源分析之依據

10. 偵測細胞內部之核酸螢光染色以分析細胞之凋零(apoptosis)情況。
11. 細胞療法:免疫細胞/癌症疫苗研發、幹細胞引導分化研究。

12. 基因診斷及基因治療:基因診斷開發、基因調控研究、基因治療研究、基因轉殖細胞研究。

13. 臨床研究推動:免疫細胞治療中心、幹細胞治療中心、基因治療中心。

14. 癌細胞對化療藥物之抗藥性檢測。
15. 細胞功能測試、細胞動態追蹤研究、細胞內細胞素檢測。
16. 過敏檢測
17. 細胞毒殺力
18. 細胞吞噬力流式細胞分析儀運用FACS螢光啓動細胞分選技術Fluorescence-Activated Cell Sorting),能夠在複雜的細胞群體中,一個一個地測定每個細胞的大小、細胞內顆粒的多寡DNARNA的含量,細胞表面標誌、細胞膜上及胞內受體、細胞蛋白質及酶的質和量等多種參數,然後基於這些參數擇出其中之一進行純化、濃集分選。FACS分選可用來培養具有特定標記或藥物標的受體的細胞株,作為藥物研究的感測細胞biosensor),或將分選所得細胞注入機體內,從事追蹤實驗in vivo cell  tracking
 
 
規格與常用抗體
 

High Speed70,000 event/sec

Sorting-2 Way                                      

              -4 Way

                                                               3 Lasers, 9 Colors + FSC and SSC
 
 
 
 

 
使用預約管理規範
           

1.   兩週前開放線上預約,最慢於一週前遞交【流式細胞分選委託申請表】完成預約申請。

     1.1 預約系統網址:   http://140.114.104.178/BIOMED/

     1.2 申請帳號以實驗室計劃主持人為單位(ex.王雯靜)

2.   預約時段為週一至週五,上午時段於十點半前、下午時段於兩點半前將欲分選細胞送至生醫中心。

3.   本服務項目以無菌分選為主,委託服務者需提供無菌狀態之檢體。

4.   不接受具感染性或對人體有危害之樣本。

5.   收費由預約時間起算,請謹慎評估時間,預約時間逾時半個小時,視同放棄。

6.   預約排定時間後,因故未能使用者,請務必前一日5點前告知取消,否則收取開機費1000元。

7.   達三次無故取消預約,本核心設施將停權三個月。

8.   欲分選細胞應至少佔總細胞量之5%以上,如欲分選細胞佔總細胞量太低雖然仍可進行分選,但無法確保細胞純度及回收率。

9.   使用者請於上機日自備一片光碟片(CD-ROM)存檔。

 

收費標準

為確保本儀器最佳服務品質,以及增加其有效服務年限,使用本儀器之個人或單位均必須分攤本儀器之耗材、保養、維修、及操作人員服務所需之費用;配合教學研究計畫之使用或示範亦需收費。

     1 請參見預約系統網址:   http://140.114.180.9/BIOMED/

 
檢體製備注意事項
 

   1.  請先用一般顯微鏡觀察細胞之活性,確定活性夠佳後再進行實驗。

   2.  請先用一般螢光顯微鏡觀察樣本,確定有螢光反應後再進行實驗。

   3.  本收費標準僅計算耗材成本,為避免浪費公共資源,請各研究人員先確認所送之樣本符合本部的規定,若因樣本不符規定而導致無法有好的實驗結果,仍依本收費標準收費。

   4.  本部上機前需花費1-2小時清洗管路及暖機,為避免浪費人力、時間、藥品及雷射壽命,請勿臨時取消實驗。

   5.  建議使用buffer配方-

        Sorting Buffer

1 × Phosphate Buffer Saline

1 % Serum

1 mM EDTA

25 mM HEPES

            

       墊底液(cushion)

15ml離心管中加入8 mlPBS+ 4% Serum

5 ml Falcon tube中加入2 mlPBS + 4% Serum

   6.  實驗所需細胞數5 × 106 體積1ml

 

 

     

  各種細胞的建議濃度如下表

 

 

 

 

Cell type
Concentration
Lymphocytes, thymocytes or splenocytes (直徑8-12 μm)
2 × 107 /ml
Activated lymphocytes, small cell lines (直徑12-20 μm)
1-2× 107 /ml
Large adherent cell line (直徑>20 μm)
5 × 106 /ml

 

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